Les équipes quittent leur point de contrôle au Tempio di Segesta et reçoivent un indice leur demandant de parcourir 217 kilomètres jusqu'à Catane, en Sicile, pour trouver l'Antiteatro Romano. Ce théâtre n'ouvre qu'à 8h30 et B.J. et Tyler, pour plaisanter, affichent une feuille de présence « officielle », rapidement dénoncée comme une supercherie par Eric et Jeremy. Finalement, ces deux équipes sont les seules à arriver à l'heure, les autres se retrouvant coincées dans les embouteillages ou perdues. Après avoir compté les têtes sur la grille entourant le théâtre, les équipes effectuent un détour : soit « Gros Poisson », où chaque membre doit transporter un espadon de 17 kilos sur 500 mètres, soit « Petit Poisson », où chaque membre doit parcourir 500 mètres jusqu'au même marché et vendre 4 kilos de petits poissons siciliens. Les équipes parcourent ensuite environ 65 kilomètres jusqu'à Syracuse, où un membre de chaque équipe participe à une épreuve de barrage routier consistant à marquer un but en kayak-polo. Enfin, elles rejoignent à pied le point de ravitaillement, la source naturelle de Funte Aretusa, et une autre équipe est éliminée.