Les cinq équipes restantes partent de leur point d'arrêt à la Croix de Pierre de Dubrovnik, en Croatie, et reçoivent un indice leur indiquant de prendre le ferry pour Ancône, en Italie. Toutes les équipes doivent d'abord se rendre en bus à Split, en Croatie. Toutes les équipes prennent le même ferry, mais la conduite difficile à Ancône provoque des retards pour plusieurs d'entre elles, si bien que seules deux sont arrivées à l'ouverture du barrage routier à 7 h. Un coureur rencontre des difficultés à plusieurs reprises au barrage, tandis qu'une autre équipe progresse dans le classement en optant pour une épreuve de passage rapide qui nécessite une importante modification physique. En cours de route, les équipes reçoivent un message de leurs familles sur un Blackberry, dont l'utilisation est strictement réservée à cet usage. Une équipe est frustrée d'avoir perdu son indice. Un coureur, exaspéré par une situation de conduite délicate, ordonne à son partenaire d'« arrêter cette voiture ! ». Une autre équipe, confrontée à une crevaison, parvient à surmonter l'obstacle et à éviter la dernière place. L'équipe qui fait étape aux jardins de Boboli à Florence, en Italie, est surprise et ravie d'apprendre qu'elle n'est pas éliminée, mais moins enthousiaste à l'idée d'une épreuve supplémentaire lors de la prochaine étape.